Seqüenciació dels gens codificadors de proteïnes relacionades amb les D-alanil-D-alanina lligases en Enterococcus casseliflavus i Enterococcus flavescens

Resumen

Utilizando oligonucleótidos degenerados complementarios a las secuencias que codifican aminoácidos altamente conservados en las d-alanina-d-alanina (DDL) ligasas, se ha amplificado un fragmento de ca. 600-pb en Enterococos Casseliflavus atcc 25788 y Enterococos Flavescens ccm439. El análisis de las secuencias amplificadas indican que cada cepa poseía dos genes, ddle.cass. Y vanc-2, y ddle.flav. Y vanc-3, respectivamente, que codifican enzimas relacionados con las DDL ligasas. Los dos fragmentos internos de Vanc fueron idénticos en un 98%. El gen vanc-2 fue clonado en Escherichia Coli y secuenciado. Se detecto una elevada similitud (66% de nucleótidos idénticos) entre vanc-2 y vanc-1 de Enterococcus Gallinarum, lo que hace presuponer que los genes vanc son necesarios para expresar la resistencia de bajo nivel a la vancomicina. La secuencia parcial deducida de aminoácidos de ddle.cass. Y ddle.flav. Fueron idénticas y estrechamente relacionadas a la DDL ligasa de Enterococcus Faecalis (identidad del 79%). En los experimentos de hibridación mediante Southern, solo el DNA de e. Casseliflavus y de e. Flavescens hibridizaron con sondas correspondientes a secuencias internas de los genes vanc-2 y ddle.cass.

Fecha de lectura	21 mar 1995
Idioma original	Catalán
Supervisor	P. Courvalin (Director/a) & Guillem Prats Pastor (Tutor/a)