Las células de mamífero han desarrollado rutas de reparación del ADN para proteger el material genético de mutaciones que podrían provocar cáncer o muerte celular. Cada ruta de reparación del ADN responde a un tipo específico de daño. La ruta de reparación Fanconi/BRCA corrige los enlaces cruzados entre cadenas de ADN que provocan roturas de doble cadena altamente perjudiciales si no se reparan. Mutaciones en los genes que constituyen dicha ruta de reparación causan una enfermedad rara llamada anemia de Fanconi. Los pacientes con dicha enfermedad tienen un alto riesgo de padecer fallo medular y cáncer. Las proteínas de la ruta FA/BRCA se clasifican dentro de tres grandes grupos: un primer complejo cuya principal función es la ubiquitinación del complejo FANCD2-I, el complejo FANCD2-I que una vez monoubiquitinado recluta proteínas al lugar del daño y un último complejo formado por las proteínas reclutadas al lugar del daño que son las encargadas de la reparación del enlace cruzado. La reparación se producirá por la eliminación del enlace cruzado, la síntesis translesión y reparación de la rotura de doble cadena vía recombinación homóloga. La letalidad sintética se utiliza en el tratamiento del cáncer para eliminar específicamente las células cancerosas. Dicha letalidad se produce por la inhibición de dos genes que conduce a la muerte celular, mientras que la inhibición única de uno de ellos no afecta a la viabilidad. Por otro lado, la resistencia a fármacos de algunas células tumorales puede ser debida a un proceso en el cual la inhibición de un gen hace viable una célula que no lo era por la inhibición de otro gen. Dicho proceso se denomina viabilidad sintética. Una aplicación de la letalidad sintética se encuentra en el tratamiento con inhibidores de PARP del cáncer de mama o de ovario con deficiencia en genes BRCA. Los genes FA se encuentran frecuentemente mutados en tumores y, hasta el momento, sólo hay descritas algunas interacciones letales sintéticas en la ruta FA, lo que abre la posibilidad de explorar en esta ruta la letalidad sintética para el tratamiento del cáncer. El objetivo de la tesis fue encontrar nuevas interacciones sintéticas letales o viables entre las proteínas FANCA y FANCD2 y otras rutas de reparación del ADN. Para ello se desarrolló el ensayo de competencia de color que detecta la letalidad o viabilidad sintética mediante citometría de flujo. Con el método CRISPR/Cas9, se generaron clones knock-out para FANCA y FANCD2 y se usaron con shRNA para silenciar un segundo gen en una ruta de reparación del ADN. Además, se emplearon líneas celulares comerciales o de pacientes con knock-outs conocidos en genes de otras vías de reparación del ADN y se trataron con shRNA para probar la letalidad o la viabilidad sintética con FANCA o FANCD2. En esta tesis con el ensayo de competición de color no se ha detectado ninguna interacción letal sintética nueva. Sin embargo, sí se han detectado dos nuevas interacciones de viabilidad sintética; una entre FANCA y FEN1 y una segunda entre FANCA y dos proteínas de la vía NER, XPA y XPF. Este descubrimiento podría dar lugar a posibles aplicaciones terapéuticas en el tratamiento de la anemia de Fanconi.
- Letalidad sintética
- Reparación del ADN
- Fanconi anemia
Discovery of synthetic lethal or viable interactions between DNA repair pathways
Steigerwald , D. (Autor/a). 8 abr 2022
Tesis doctoral