Determinación de la sensibilidad a los antivíricos de las cepas de herpesvirus aisladas de muestras clínicas. Puesta a punto y evaluación de las técnicas

Resumen

Objetivos: Puesta a punto de la técnica de reducción del número de placas (PRA), para estudiar la sensibilidad in vitro al ganciclovir (GCV) y al foscarnet (FOS) de las cepas de herpesvirus humano tipo 5 (HHV-5) y al aciclovir (ACV) y al FOS de las cepas de herpesvirus humano tipo 3 (HHV-3). Puesta a punto de las técnicas de reducción del efecto citopático (REC) y de coloración vital (DUA), para estudiar la sensibilidad in vitro al ACV y al FOS de las cepas de herpesvirus humanos tipos 1 y 2 (HHV-1 y HHV-2). Análisis de los valores de sensibilidad a los antivíricos de las cepas de HHV-1, 2 y 5 y comparación con la evolución clínica de los pacientes tras el tratamiento. Material y métodos: Se ha estudiado la sensibilidad de 204 cepas de HHV-1 y 2 aisladas de diferentes muestras de 165 pacientes inmunodeprimidos. Los valores de sensibilidad al antivírico se expresan como dosis inhibitoria 50% (DI50) y se calculan mediante el método de Spearman-Kärber cuando la técnica utilizada es la de REC y estadísticamente, mediante una estimación lineal, cuando se utiliza la de DUA. Asimismo, se ha estudiado la sensibilidad de 80 cepas de HHV-5 aisladas de las muestras de 73 pacientes con o sin patología de base y de nueve cepas de HHV-3 aisladas de las muestras tomadas de lesiones cutáneas de nueve pacientes. Los valores de DI50 se calculan mediante el método de Reed-Muench modificado. Resultados: El 96% de las cepas de HHV-1 y 2 estudiadas fueron sensibles a valores de DI50 del ACV inferiores a 3 mg/ml y todas fueron sensibles a valores de DI50 del FOS inferiores a 200 mg/ml. El 98% de cepas de HHV-5 fueron sensibles a valores de DI50 de GCV inferiores a 12 mM e inferiores a 400 mM en el caso del FOS. Todas las cepas de HHV-3 fueron sensibles tanto al ACV como al FOS. Conclusiones: 1 - La técnica de REC es sencilla y útil para estudiar la sensibilidad de los HHV-1 y 2. 2 - La técnica de REC presenta una reproducibilidad del 87%. 3 - La adición de colorante vital en la técnica de REC añade complejidad a la técnica. 4 - Los valores obtenidos con las técnicas de REC y de PRA correlacionan con la evolución clínica de los pacientes. 5 - La frecuencia de HHV-1 y 2 resistentes al ACV en pacientes inmunodeprimidos es baja (4%) y cuando se observa no es necesariamente indicativa de fallo terapéutico. 6 - La técnica de PRA para el estudio de la sensibilidad de los HHV-5 y 3 es sencilla y requiere entre seis y ocho semanas lo que limita parcialmente su utilidad clínica.7 - La frecuencia de cepas de HHV-5 resistentes in vitro al GCV (4%) y al FOS (4%) en pacientes no tratados previamente es baja. 8 - No se detectó ninguna cepa de HHV-3 resistente al ACV o al FOS. 9 - Nuestra experiencia confirma que no es necesaria la realización de estudios de sensibilidad de los herpesvirus de forma rutinaria. Estos estudios estarían indicados en las cepas aisladas de pacientes con alteraciones inmunológicas graves cuyas lesiones siguen evolucionando o empeoran estando en tratamiento con el antivírico.

Fecha de lectura	15 feb 2002
Idioma original	Indefinido/desconocido
Supervisor	Núria Rabella García (Director/a)