Aproximación experimental y teórica a las carboxipeptidasas pancreáticas y reguladoras

Resumen

Las metalocarboxipeptidasas son enzimas que escinden residuos C-terminales de otras proteínas o péptidos. Dentro de esta familia de proteínas encontramos, por un lado, las procarboxipeptidasas pancreáticas y, por otro, las carboxipeptidasas reguladoras. Las procarboxipeptidasas pancreáticas son un sistema muy estudiado, del cual se cuenta con numerosos datos, tanto a nivel estructural como a nivel funcional. En esta tesis se han estudiado los mecanismos de activación e inhibición de una proteína perteneciente a este grupo, la procarboxipeptidasa B porcina. Para ello, se han obtenido mutantes de esta proteína mediante el método de expresión heteróloga de la levadura Pichia pastoris, que nos han ayudado a acabar de definir su proceso de activación, relacionándolo con algunas de sus características estructurales. En las carboxipeptidasas reguladoras se habían realizado algunos estudios funcionales, pero hasta el momento del inicio de esta tesis, eran completamente desconocidas a nivel estructural. En este trabajo se ha conseguido expresar, purificar y concentrar el dominio 2 de la carboxipeptidasa D (CPD) de pato a niveles adecuados para su cristalización y se ha resuelto su estructura cristalina. Consideramos que ésta es un prototipo para las carboxipeptidasas reguladoras, ya que es la primera estructura que se ha obtenido de esta subfamilia, y la única hasta el momento. Por último, nos hemos basado en la estructura cristalina del dominio 2 de CPD de pato para confeccionar modelos teóricos de otras reguladoras (dominios 1 y 3 de CPD de pato y CPE humana) Además, se ha resuelto la estructura del mismo dominio acomplejado con un inhibidor. La obtención de la primera estructura cristalina de una carboxipeptidasa reguladora abre las puertas para el estudio de la relación estructura/función en esta subfamilia.

Fecha de lectura	23 abr 2002
Idioma original	Indefinido/desconocido
Institución de lectura	Universitat Autònoma de Barcelona (UAB)
Supervisor	Josep Vendrell Roca (Director/a) & Sandra Villegas Hernandez (Director/a)