A Multi-Site Assessment of Anesthetic Overdose, Hypothermic Shock, and Electrical Stunning as Methods of Euthanasia for Zebrafish (Danio rerio) Embryos and Larvae

Los peces cebra (Danio rerio) de menos de cinco días después de la fertilización no están protegidos por la legislación, y los protocolos para su eutanasia son poco explorados. En el presente artículo, evaluamos la eficacia eutanásica de una sobredosis anestésica, un shock hipotérmico y aturdimiento eléctrico en peces cebra a menos de 12 horas después de la fertilización (dpf) y 4 días después de la fertilización utilizando laboratorios en diferentes países. Basándonos en las tasas de supervivencia/recuperación 24 h después del tratamiento, los métodos más efectivos fueron una sobredosis con aceite de clavo o lidocaína con etanol, y aturdimiento eléctrico. Para las larvas más viejas, signos de aversión durante el tratamiento demostraron que todos los anestésicos probados, excepto la lidocaína, indujeron un comportamiento aversivo. Por lo tanto, el método más adecuado fue el clorhidrato de lidocaína 1 g/L, tamponado con bicarbonato sódico 2 g/L y mezclado con 50 ml/l de etanol. El aturdimiento eléctrico también eutanizó eficientemente embriones y larvas sin signos de aversión; este método es nuevo y necesita una evaluación adicional en otros laboratorios para sacar conclusiones firmes. La eutanasia en peces cebra (Danio rerio) menores de cinco días después de la fertilización (dpf) está pobremente descrita en la literatura, y faltan protocolos estandarizados, probablemente porque las larvas no son capaces de alimentarse por sí mismas y a menudo no están protegidas bajo legislaciones nacionales. Evaluamos la eficacia eutanásica del aturdimiento eléctrico en laboratorios de diferentes países durante una hora con una sobredosis anestésica (1 g/l) con lidocaína tamponada, tricaína (1 g/l), aceite de clavo (0,1%), benzocaina (1 g/l), o 2-phenoxyethanol (3 ml/l), así como la eficacia del shock hipotérmico (una hora de inmersión) y aturdimiento eléctrico en peces cebra a menos de 12 horas después de la fertilización (hpf), 24 hpf, y 4 dpf. Basándonos en las tasas de supervivencia/recuperación 24 h después del tratamiento, los métodos más efectivos fueron el aceite de clavo, lidocaína con etanol, y aturdimiento eléctrico. Para larvas de 4 dpf, signos de aversión durante el tratamiento demostraron que todos los anestésicos, excepto la lidocaína, indujeran un comportamiento aversivo. Por lo tanto, el método más adecuado fue el clorhidrato de lidocaína 1 g/l, tamponado con bicarbonato sódico 2 g/l y mezclado con 50 ml/l de etanol, que eutanizó eficazmente embriones y larvas sin signos de aversión; este método necesita una evaluación adicional en otros laboratorios para sacar conclusiones firmes.