Proteómica clínica: análisis de las células Treg naturales CD4CD25 en autoinmunidad y en salud

Las células T reguladoras naturales CD4CD25\super ++\nosuper (n tregs) son emigrantes tímicos que participan en la homeostasis del sistema immune, por lo que un defecto funcional de esta población es clave en el desarrollo de autoimmunidad. En enfermos es difícil analizar los Tregs debido a la ausencia de un marcador exclusivo. Los marcadores que se han descrito son compartidos por células T efectoras/memoria e incluso algunos, por células T reguladoras inducidas (Tr1). La incapacidad hasta ahora de poder aislarlas como una subpoblación pura, sin contaminación por otros linajes de células T, hace limitado su uso como agentes de terapia celular. La proteómica comparativa de las nTreg de timo, sangre de cordón y periferia permitirá definir el perfil proteómico de las nTregs desde su generación hasta el adulto. Este perfil proteómico definido en salud, permitirá determinar si existen variaciones en las n Tregs de pacientes con diabetes tipo 1o enfermedad de Graves. OBJETIVO PRINCIPAL: Análisis proteómico comparativo de las célular Treg naturales obtenidas de timo, sangre de cordón umbilical y sangre periférica de donantes sanos. Definición de un patrón de marcadores específicos y estudio de este patrón de células Tregs de pacientes con enfermedades autoimmunes endocrinas. METODOLOGÍA: Caracterización del fenotipo por citometría de flujo. Separación por sorting o beads magnéticos de las células T CD4\super +\nosuper CD25\super -\nosuper y CD25\super ++\nosuper . Comparación de proteomas por el sistema EttanDIGE de alta sensibilidad. Secuenciación de los spots diferenciales por MALDI-Tof o LCQ. Comprobación de las diferencias mediante técnicas alternativas: PCR cuantitativa a tiempo real (qPCR) y Western Blot.