Plataforma modular CRISPR/Cas para biosensado electroquímico portátil en diagnóstico clínico, sanidad animal y vigilancia ambiental

El proyecto CRISPER tiene como objetivo desarrollar una plataforma de diagnóstico portátil basada en la tecnología CRISPR/Cas integrada en un biosensor electroquímico alimentado por baterías. La propuesta se sitúa en el marco "Una Salud", abordando la detección precoz de patógenos y biomarcadores en salud humana, sanidad animal y seguridad del agua y los alimentos. La idea central es disponer de un sistema versátil que permita cuantificar ADN y ARN en el propio punto de necesidad, sin depender de laboratorios centrales ni de instrumentación compleja. El método combina la preparación magnética de la muestra, la amplificación de ácidos nucleicos, el tratamiento con enzimas CRISPR/Cas y la lectura electroquímica en un mismo flujo de trabajo simplificado. Para generar la señal analítica, CRISPER emplea técnicas de preamplificación isotérmicas (LAMP y RPA) y PCR. La amplificación se realiza en un termociclador portátil de mano, alimentado por baterías. Tras la amplificación, el producto se trata con las enzimas CRISPR/Cas y los correspondientes reactivos de reporte liofilizados en un único paso y, finalmente, se introduce en un cartucho desechable acoplado a un biosensor electroquímico para la lectura de la señal mediante un lector portátil alimentado por baterías. La plataforma se organiza en tres módulos complementarios: un módulo basado en Cas9 para la detección de amplicones de ADN de doble cadena; un módulo Cas12a que explota su actividad colateral sobre sondas de ADN de cadena sencilla; y un módulo Cas13a orientado a la detección de ARN, incluidos transcritos presentes en exosomas. En todos los casos, la acción de la nucleasa se traduce en una señal eléctrica tipo encendido/apagado, fácil de interpretar en campo. El sistema se validará en tres dominios representativos en el marco de "Una Salud": detección de coliformes y Legionella en matrices ambientales de agua y alimentos; vigilancia de virus respiratorios aviares en granjas avícolas; y análisis de transcritos inflamatorios en vesículas extracelulares, como apoyo a la estratificación de la gravedad de la infección en pacientes. Partiendo de proyectos previos a escala de laboratorio, CRISPER avanza hacia un prototipo modular con reactivos liofilizados y funcionamiento autónomo, reduciendo la distancia entre la prueba de concepto y el uso real en campo. Apoyado en una sólida red de socios académicos, clínicos e industriales, el proyecto aspira a abrir camino a futuras rutas de transferencia, estandarización y adopción de herramientas CRISPR portátiles en contextos de diagnóstico descentralizado.