Optimització dels processos de síntesi i secrecció de proteïnes heteròlogues en el sistema pichia pastoris

La eficiente producción de proteínas recombinantes es el paso clave para su aplicación a escala industrial (producción de proteínas de interés terapéutico, enzimas industriales...). Para ello es necesario conocer profundamente la relación estructura-función de la proteína d4e interés. La eficacia del proceso depende de la combinación de diversos factores de naturaleza genética y fisiológica tales como los componentes funcionales de los vectores de esptesión utilizados, el \i background\i0 genético del microorganismo huésped y las condiciones de crecimiento. Otros factores pueden determinr la calidad o pureza del producto final, por ejemplo el correcto plegamiento y glicosilación del producto necesarios para su plena actividad biológica y su secreción al medio de cultivo para facilitar el posterior proceso de purificación. En los útlimos años la levadura metilotrófica \i Pichia pastoris\i0 se ha revelado como un excelente "fábrica celular" para la producción de proteínas heterólogas de muy diversa naturaleza con altas productividades. El objetivo de este proyecto se centra en diversos aspectos del proceso de producción y secreción del sistema relativamente poco conocidos y susceptibles de ser mejorados. Concretamente el estudio se centrará en la mejora de la producción de dos lipasas de diferente origen (\i Candida Rugosa\i0 , CRL y \i Rhisopus oryzae\i0, ROL ) de amplias aplicaciones en la producción de compuestos intermediarios o productos finales de síntesis de fármacos ópticamente puros. Dicha mejora integrará aspectos de mejora de vectores de expresión, por ejemplo: l a expresión de múltiples copias de los genes \i CRL\i0 y \i ROL\i0 , la construcción de mutantes supersecretivos, y la optimización de las condiciones fisiolóficas de crecimiento y producción para estos nuevos sistemas de expresión. Todo ello bajo un enfoque multidisciplinar y complementario claramente reflejado en la experiencia investigadora de ambos grupos solicitantes.