Mètodes estructurals i quimioluminiscents per a l'anàlisi de cromatina, proteïnes i DNA.

Recientemente hemos publicado los resultados de investigaciones sobre la estructura de pequeños fragmentos de cromatina de eritrocitos de pollo (Bartolomé et al., J. Cell Sci., 107 (1994) 2983-2992 y J. Biol. Chem. 270 (1995) 22514-22521). En estas investigaciones hemos utilizado técnicas electroforéticas no desnaturalizantes y de microscopia electrónica que nos han permitido estudiar detalladamente el plegamiento y la estructura interna de estos fragmentos de cromatina. Nuestros resultados demuestran que en el caso de los eritrocitos la cromatina forma estructuras helicoidales simples y muy compactas. En el presente proyecto se pretende aplicar los procedimientos electroforéticos y de microscopía electrónica desarrollados para los eritrocitos de pollo, para estudiar la estructura de pequeños fragmentos de cromatina correspondientes a tejidos con distintos niveles de actividad genética (hígado de rata, timo de ternera, esperma de erizo de mar). También estudiaremos levadutras, para conocer hasta que punto un sistema sin histona H1 puede estructurar la cromatina. Además, para poder aportar más información sobre la estructura interna de las fibras de cromatina, intentaremos encontrar condiciones que nos permitan la desnaturalización progresiva de los fragmentos compactos de cromatina. Por otra parte, en nuestro laboratorio hemos desarrollado métodos fluorexcentes para la detección de proteínas en geles electroforéticos [Dabán et al., \i Anal. Biochem., 199\i0 (1991) 169-174; Bermúdez et al., \i BioTechniques, 16\i0 (1994) 621-624]. Estas contribuciones, y toda nuestra experiencia previa en el campo de las sondas fluorescentes, nos ha estimulado a investigar las aplicaciones en Biología Molecular de reactivos quimioluminiscentes (esteres del ácido oxàlico) que son capaces de excitar a fluorofósforos diversos. En esta segunda parte del proyecto se pretende desarrollar métodos que permitan utilizar los reactivos quimioluminiscentes TCPO y DNPO para la detección