Identificació de ceps bacterians resistents a quinolones, a través d'hibridació de colònies amb sondes específiques

La utilización de las nuevas quinolonas ha conllevado una creciente y preocupante frecuencia de aislamientos de patógenos resistentes a estos agentes bactericidas, lo cual ha estimulado enormemente el estudio de los mecanismos de resistencia bacteriana a dichos compuestos. Se ha descrito en \i E. coli\i0 y en otras especies bacterianas que una de las principales causas de resistencia son determinados cambios de bases en la "región determinante de resistencia a las quinolonas" (QRDR) del gen \i gyrA\i0 . que originan una enzima DNA girasa resistente a la acción de estos antimicrobianos. En este proyecto se propone identificar a las cepas portadoras de dichas mutaciones mediante hibridación de colonia con una colección de sondas capaces de detectar específicamente las mutaciones responsables de dicha resistencia. En este estudio se analizarán cepas resistentes de diferente procedencia de \i Campylobacter jejuni\i0 , especie con una alta frecuencia de aislamientos resistentes, de \i E. coli\i0 , con una frecuencia mucho menor y de \i Salmonella typhimurium\i0 , especie en la que la tasa de resistentes que se detecta es muy baja. Además, se podrán localizar nuevas mutaciones causantes de resistencia, dado que se secuenciarán diferentes regiones del gen \i gyrA.\i0 de las cepas que den una hibridación negativa con las sondas de la región QRDR. Por otra parte, mediante hibridación, en los aislados resistentes de \i E. coli\i0 se detectará la presencia de mutaciones adicionales en los genes \i gyrB, parC y marR\i0 , causantes también del fenotipo de resistencia a quinolonas. Asimismo, se estudiará la correlación entre la presencia de las mutaciones detectadas, el nivel de resistencia a diferentes quinolonas (CMIs) de los aislados resistentes y su susceptibilidad a antimicrobianos no relacionados. Finalmente, a través de este trabajo se dispondrá de una colección de sondas útiles para la identificación por hibridación de cepas resistentes a quinolonas en las tre