Funció biològica i relacions estructura-funció en la família de les alcohol deshidrogenases

Las alcohol deshidrogenasas (ADH) constituyen una extensa familia de enzimas relacionados, ampliamente distribuida en la naturaleza. Estos enzimas se han agrupado en clases en base a su estructura primaria y propiedades cinéticas. Aunque todas las ADH oxidan reversiblemente alcoholes, su especificidad de sustrato y, por consiguiente, su función biológica, varian considerablemente entre las clases. En el presente proyecto vamos a proseguir los estudios de caracterización estructural y funcional de las ADH clase III y clase IV de distintas especies. La clase IV se distribuye en epitelios, y es característica de la mucosa del estómago. Es la ADH más activa, con elevadas kcat y Km, por lo que identificaremos por mutagénesis dirigida los residuos responsables de estas propiedades. También estudiaremos la estructura del gen de la clase IV humana, para comprender la regulación de su expresión. mediante técnicas inmunohistoquímicas y de hibridación \i in situ\i0 estudiaremos la localización detallada de la expresión de la clase IV en los tejidos de rata, haciendo énfasis en cerebro. Por su parte, la ADH clase III funciona como formaldehído deshidrogenasa dependiente de glutación. Determinaremos los residuos importantes en laespecificidad enzimática mediante mutagénesis dirigida y mutagénesis al azar utilizando la clase III de \i Saccharomyces cerevisae\i0 ,. En esta especie determinaremos también las proteínas que interaccionan con la clase III, 7y averiguaremos la posible localización del enzima del núcleo celular. Para conocer el papel de la clase III en los vegetales, estudiaremos el enzima de \i Arabidopsis thaliana\i0 . Se expresará el enzima en una cepa ADH clase III de levadura y se estudiará la localización del enzima en los tejidos de \i Arabidopsis\i0 , y la capacidad de la planta en captar y metabolizar el formaldehído, tanto a nivel de planta entera como de cultivos celulares, para determinar el posible papel desintoxicador de la planta sobre el forma