Estudio de los mecanismos de regulación mediante fosforilación de proteinas en la levadura S. cerevisiae

La fosforilación reversible de proteínas es uno de los mecanismos de modificación de proteínas que juegan un papel crítico en todas las formas de vida al regular importantes y diversas funciones celulares. Las proteínas quinasas (PK) y fosfatasas (PP) son, respectivamente, los enzimas responsables de la fosforilación y desfosforilación de los substratos, modificando sus actividades enzimáticas, localización celular o moléculas a las que se unen. Estamos lejos aún de entender por completo las complejas vías de señalización que tienen lugar en la célula. Es por ello que se hace evidente la necesidad de aplicar nuevas estrategias para un más rápido avance en este campo. Planteo el uso de la combinación de las poderosas tecnologías de genómica y proteómica en conjunción con técnicas de genética y bioquímica para estudiar los eventos de señalización intracelular a través de la fosforilación de proteínas utilizado la levadura S. cerevisiae como modelo. La experiencia acumulada durante el último proyecto, en el que se han analizado miembros de la familia de PP de tipo 2C de levadura (Ptc1 a Ptc5), nos ha demostrado que el estudio de los cambios en la expresión, mediante microarrays de DNA, producidos ante la falta de una actividad PK o PP, permiten la asignación de funciones a estas proteínas. En este proyecto se pretende profundizar en el estudio de las vías en las que Ptc1 interviene, así como continuar utilizado esta tecnología para determinar los cambios en la expresión consecuencia de la ausencia de cada una de las subunidades reguladoras, esenciales y no esenciales, de la PP de tipo 1 Glc7. Al mismo tiempo nos proponemos la identificación de substratos tanto de PK como de PP basándonos en técnicas a gran escala, como el uso del microchip del proteoma de levadura y electroforesis bidimensional. Candidatos a este estudio son, inicialmente, la MAPK Slt2, de la que disponemos de resultados preliminares, y la PP2C Ptc1. (...)