Estudi de l'estructura funció de l'alcohol deshidrogenasa humana mitjançant mutagènesi dirigida. Aplicació al redisseny de l'especificitat de substrat amb fins biotecnològics

El alcohol deshidrogenasa (ADH) cataliza la interconversión del etanol y otros alcoholes con sus correspondientes aldehidos y cetones. El ADH es uno de los enzimas más conocidos en lo que ser refiere a su estructura molecular. El centro activo del enzima contienen un átomo de Zn y solo es acesible a trvés de un túnel hidrogóbico. Los residuos de aminoácidos cercanos al átomo de Zn y los que envuelven el túnel hidrofóbico confieren peculiares especificidades de substrato a las diferentes formas de ADH. El ADH humana Classe III/ formaldehid deshidrogenasa posee una elevada especificidad de sustrato para los omega- hidroxiácidos y el substrato natural S-hidroximetilglutatión. Se ha postulado que el residuo Arg 304 se encuentra a una distancia adecuada para la interacción con los grupos carboxilos de los substratos mencionados. El proyecto tiene como objetivo el estudio de las relaciones estructura- función en el ADH utilizando el ADH Clase III como un modelo. Los objetivos parciales serán los siguientes: 1) Expresión del ADH del hígado humano (Classe III) a E. Coli. 2) Purificación y caracterización del ADH Classe III recombinante 3) Modelaje molecular para ordenadores de la estructura tridimensional del ADH Classe III basado en las coordenadas cristalogràficas del Adh de caballo. 4) Mutagénesis de los residuos del túnel hidrofóbico 5) Mutagénesi del residuo Arg 304 6) Mutagénesis de los residuos alrededor del Zn catalítico.7) Purificación y caracterización de las proteínas mutantes