Estructura de la cromatina condensada en els cromosomes metafísics i anàlisi luminiscent d'electroforesi bidimensional

El punto de partida de la primera parte de este proyecto es un trabajo teórico que hemos publicado previamente sobre las restricciones físicas que existen en la condensación de la cromatina en los cromosomas metafásicos. El objetivo general de esta parte es el estudio de las estructuras de orden superior contenidas en las formas condensadas de la cromatina. Este objectivo será abordado mediante dos aproximaciones experimentales complementarias: a) estudio de las estructuras formadas por asociación de fibras de 30-40 nm; b) estudio de las estructuras de orden superior presentes en los cromosomas metafásicos. Se investigarán las condiciones iónicas, compatibles con los valores celulares conocidos en la actualidad, necesarias para provocar la asociación de fibras. Se prepararán cromosomas metafásicos y prometafásicos de células HeLa, y de especies (pollo y \i Drosophila\i0) que contienen cromosomas de pequeño tamaño en su cariotipo. Para investigar las estructuras cromatínicas contenidas en los cromosomas, se utilizarán condiciones iónicas, y tratamientos con agentes desnaturalizantes, que provoquen una desestructuración parcial de las cromátidas. En estos estudios se utilizará microscopía electrónica de transmisión y de barrido, y microscopía de fuerza atómica. En la segunda parte del proyecto se pretende investigar exhaustivamente la reacción quimioluminiscente del peroxioxalato, con el objetivo de mejorar la sensibilidad alcanzada previamente en nuestro laboratorio en la detección de proteínas y DNA transferidos a membranas. Es un objetivo importante porque esta reacción tiene un elevado rendimiento cuántico y no requiere enzimas, pero todavía no ha encontrado aplicaciones competitivas en Biología Molecular porque necesita medios orgánicos para producirse. Además, también se propone como objetivo la extensión de estos métodos quimioluminiscentes para el análisis de geles bidimensionales