Desenvolupament d'un nou reactiu enzimàtic per a la detecció ràpida d'anticossos contra el virus de la Hepatitis B Humana

Se propone utilizar el principio de activación enzimática de la \beta-galactosidasa de \i Escherichia coli\i0 , identificado en el proyecto BIO95-0801 (Benito et al., 1996 J Biol. Chem. 271, 21251), para construir en reactivo de diagnóstico para la hepatitis B humana, basado en la detección rápida de anticuerpos anti-virus. Se propone insertar variantes de longitud del péptido (desde los aminoácidos 121 al 147 de la proteína HBsAg) entre los residuos 278 y 279 y/o adyacentes del bucle activador del enzima \beta-galactosidasa de \i Escherichia coli, \i0 y si procede, extender las fusiones al extremo C-terminal del dicho enzima. La actividad enzimática que es posteriormente recuperada tras la unión con anticuerpos específicos, de una manera dependiente de título. Dado que no existen todavía bases estructurales para la reactivación enzimática, se propone una aproximación empírica a través de la generación de variantes del enzima quimérico y modificación de secuencias adyacentes al sitio de inserción, para obtener un nuevo reactivo enzimático de diagnóstico. Esta nueva sonda molecular para una detección enzimática de anticuerpos, debe tener un bajo coste de producción, ser fácilmente purificable, con una actividad enzimática residual muy baja y una buena respuesta dependiente del título de suero, y que pueda ser competitiva con los ensayos actualmente disponibles para detección serológica de la infección por el virus de la hepatitis B.