Contribución de la vía de PDK1 a la supervicencia y diferenciación neuronales: caracterización de ratones knopck-in de PDK1 específicaos de neurona

El objetivo principal de este proyecto es definir la contribución relativa que las isoformas de PKB aportan a la supervivencia y diferenciación neuronales con respecto a otras quinasas reguladas por PDK1. Para ello se utilizarán ratones \i knock-in\i0 condicionales que expresan específicamente en sistema nervioso formas mutantes de PDK1 incapaces de activar: 1)las diferentes isoformas de PKB, o 2)el resto de substratos de PDK1 (p70S6K, SGK, p90rsk, e isoformas de PKC). Se caracterizará en primer lugar el fenotipo de estos ratones. Para ello se realizará una análisis anatomopatológico es histológico fino del sistema nervioso, y se evaluarán el número, tamaño y morfología de diferentes poblaciones neuronales. Se estudiaran también la fisiología y el comportamiento de los ratones \i knock-in\i0 condicionales de PDK1 durante su desarrollo postnatal. Se estableceran cultivos neuronales primarios derivados de los ratones \i Knock-in\i0 . Se evaluará la contribución de los diferentes substratos de PDK1 a la supervivencia y diferenciación de estas neuronas en respuestaa factores tróficos, así como a situaciones de estrés y estímulos apoptóticos. Se analizará en estos cultivos la participación de las diferentes dianas de PDK1 en la señalización intracelular inducida por factores neurotróficos. Para ello se medirá la acrividad de las quinasas activadas por PDK1 y se estudiará el estado de fosforilación de diferentes sustratos fisiológicos de PKB relacionados con procesos de supervivencia celular, como FOXO1, CREB, GSK3, BAD y IKK, así como de los substratos de p70S6K implicados en el control de crecimiento celular, como S6 y 4E-BP1.