Caracterització fisiològica, estructural i cinètica dels enzimes Adh6p, Adh7p, Bhd1p i Yal061p de S. cerevisiae. Aplicacions a la indústria biotecnològica

El objetivo propuesto en el presente proyecto es la caracterización fisiológica de cuatro alcohol deshidrogenasa (Adh6p, Adh7p, Bhd1p y Yal061p), de Saccharomyces cerevisiae. Considerando las actividades enzimáticas de Adh6p, Adh7p y Bhd1p y las vías metabólicas conocidas en S.cerevisiae, hemos inferido su posible participación en la formación de los alcoholes superiores (Adh6p y Adh7p) y en la formación de 2,3-butanodiol (Bhd1p y Yal061p). Dado que sus actividades enzimáticas requieren NADP/NADPH (Adh6p, Adh7p) y NAD/NADH (Bhd1p y probablemente Yal061p), podrían estar implicados en la homeostasis de estos coenzimas. Recientes estudios realizados con chips genómicos indican su inducción en condiciones de estrés oxidativo y salino. Estudiaremos, pues, la participación de estas deshidrogenasas en los procesos mencionados, midiendo tanto sus niveles de expresión, como la producción de alcoholes superiores, 2,3-butanodiol y balances redox NAD/NADH y NADP/NADPH en diferentes medios de cultivo y en diferentes fases de crecimiento. Estos experimentos serán realizados con cepas delecionadas en las deshidrogenasas y las correspondientes cepas "control". Complementaremos dichos estudios, siguiendo los niveles de las cuatro Adhs en diferentes condiciones de estrés oxidativo (meniadona, diamida, H2O2) y salino (NaCl). ya que hemos resuleto recientemente la estructura 3-D de Adh6p, realizaremos experimentos de mutagénesis dirigida sobre el enzima, que al pertenecer a la familia de las cinamil alcohol deshidrogenasas, tiene una gran relevancia biotecnológica. También nos proponemos estudiar en este proyecto, la utilización de Bdh1p para la presentación de productos quirales de interés para la industria química y para eliminar productos que confieren propiedades organolépticas desagradables a la cerveza.