Basses Moleculares de la Actividad enzimatica, plegamiento y funciones biologicas de las Ribonucleasas

La ribonucleasas (RNasas) son enzimas que, dadas sus propiedades, son modelos idóneos para los estudios de los procesos de catàlisis, interaccion enzima-sustrato y plegamiento proteico, además en el estudio de estas enzimas se han abierto nuecas posibilidades como consecuencia de su implicación en diferentes procesos celulares. El presente proyecto tiene como finalidad avanzar en el conocimeinto de las bases moleculares que definen las propiedades estructurales y funcionales de las RNasas. Se han definido 4 objetivos generales que tienen en común, desde el punto de vista metodológico, el análisis del efecto producido por la introducción de variantes, por mutagénesis dirigida, respecto de la forma nativa: 1) Estudio de las bases moleculares y estructurales que definen la actividad enzimática de la proteína catiónica de eosinófilo (ECP), de la neurotoxina derivada de eosinófilo (EDN) y de la RNasa humana de páncreas (HP-RNasa) en relación con la RNasa de pancreas bovino (RNasa A); en cada caso el anàlisis que se plantea es específico viene definido por los conocimientos sobre el proceso de catálisis y la estructura de la proteína es específico, viene definido por los conocimientos sobre el proceso de catálisis y la estructura de la proteína y va dirigido a establecer las bases estructurales de la catálisis de las RNasa. 2) Estudio de la contribución de residuos que forman parte de un nucleohidrofóbico sobre la estabilidad global y camino de plegamiento de las RNasas de páncreas y análisis del efecto de la presión sobre la estructura proteica en relación con el efecto producido por otros agentes desnaturalizantes; en este objetivo, dada la información previa de que se dispone, se utilizará como modelo de estudio la RNasa A. 3) Obtención de variantes de la RNasa humana de páncreas (HP-RNasa) dirigidas a incrementar su actividad citotóxica y de variantes de la onconasa dirigidas a incrementar su actividad RNasa; las variantes que se proponen se basan en el