Aplicació d'estratègies d'enginyeria metabòlica en la millora de processos basats en el cultiu in vitro de cèl.lules animals

El proyecto solicitado aborda la mejora de procesos basados en el cultivo de células animales a partir de los resultados y la tecnología que se ha desarrollado en proyectos anteriores. El punto de partida se basa en que, incluso en procesos que han sido mejorados de forma notable en base a la introducción de sistemas de control y de cultivo en perfusión, se observan importantes cuellos de botella, siendo el más importante la elevada muerte celular en los cultivos, asociada a un metabolismo primario desregulado en las condiciones de cultivo en biorreactor y al proceso de muerte celular programada, que puede dispararse por múltiples causas en estas células. El proyecto plantea afrontar esta limitación combinando simultáneamente aspectos macroscópicos del cultivo y aspectos a nivel de modificación genética de las céllulas (ingeniería metabólica). En concreto, se plantea desarrollar una estrategia de cultivo de tipo bifásico, en la que se desacople una primera fase de crecimiento, para obtención de un número de células elevado, de una segunda fase en que el cultivo se mantenga en condición citoestática, productiva, y de larga duración. El proyecto plantea diferentes alternativas para lograr esta transición, tanto en cultivos en discontinuo alimentado como en perfusión. En cualquier caso, esta estrategia debe complementarse con la modificación de las células a nivel genético, en concreto introduciendo una protección mediante genes inhibidores del proceso de apoptosis, que permita minimizar la muerte celular a lo largo de esta segunda gase productiva. Se utilizan dos líneas celulares muy representativas de estos cultivos a escala industrial: hibridomas y CHO, que producen respectivament un anticuerpo monoclonal y t-PA recombinante.