Anàlisi dels factors clau en el plegament incorrecte i proteolisi de proteïnes recombinants produïdes en \i Escherichia coli\i0

Se va estudiar la formación de cuerpos de inclusión y la proteolisis, en \i E. coli\i0 recombinante, de una serie de proteínas de fusión \beta-galactosidasa y de mutantes del factor de crecimiento de fibroblastos (bFGF) expresados bajo el control de sistemas termoinducibles e inducibles por IPTG. Con estas dos proteínas modelo se optimizarán protocolos de producción que aumentan el rendimiento volumétrico de la producción de proteínas recombinantes. En nuestro laboratorio se ha construido una colección de proteínas de fusión \beta-galactosidasa estrechamente realcionadas con la misma secuencia de aminoácidos pero con diferentes posiciones relativas de los dominios homólogos y heterólogos. Con ellas pretendemos estudiar las influencias de la posición relativa de los dos dominios sobre sus vids medias y sobre el patrón de formación y composición de los cuerpos de inclusión, así como sobre su producción en cultivos de alta densidad. Este trabajo se realizará parcialmente por nosotros en el laboratorio de la Dra. Rinas. Por otro lado, se construiran mutantes puntuales de la proteína bFGF reemplazando cisteínas por serinas en lugares estructuralmente críticos para estudiar el comportamiento de los mismos con respecto a las propiedades biotecnológicas mencionadas anteriormente. La construcción de dichos mutantes se llevaría a cabo por miembros del grupo alemán en nuestro laboratorio