Alteració de la localització subcel·lular de la guanili ciclasa soluble durant la divisió cel·lular

(...) El objetivo general del presente proyecto es estudiar la localización subcelular de la sGC y del cGMP durante la proliferación celular. Este estudio va a constituir la primera fase de un proyecto en el que se estudiará el papel de la sGC y del cGMP en la división celular. Se abordarán concretamente los siguientes objetivos: 1. Analizar la localización subcelular de las distintas subunidades de la sGC y de su actividad. a) se analizará la localización celular de las distintas subunidades de la sGC ( 1, 1 y 2 ) en células de glioblastoma de rata C6 transfectadas transitoriamente con el plásmido GFP de cada una de ellas por "time-lapse" (seguimiento en tiempo real en cuarta dimensión) por el sistema de microscopía laser-confocal. También se analizará la localización de estas proteínas en células cotransfectadas con ambas subunidades ( 1/ 1 o 1/ 2) ya que la subunidad 1 es la subunidad necesaria para que los heterodímeros presenten actividad. b) se analizará la localización celular del cGMP en respuesta a donadores de NO en astrocitos y células C6. 2. Analizar los cambios en la localización subcelular de la subunidad 1 de la sGC durante las distintas fases del ciclo celular y de la mitosis. a) se analizará la localización subcelular de la subunidad 1 por microscopía confocal en astrocitos y células C6 sincronizados en las diferentes fases del ciclo celular y de la mitosis. En estas mismas células se realizará un subfraccionamiento celular para analizar por inmunoblot cambios de localización y de niveles de expresión de la proteína en las células interfásicas y las mitóticas. b) se realizará un estudio comparativo en un panel de líneas celulares de diferente origen celular y de especie (con y sin actividad sGC) con el fin de averiguar si esta localización nuclear de la sGC se trata de un fenómeno generalizado y conservado tanto en células animales como en humanas