Aïllament i caracterització d'un nou tipus de repressor LexA pertanyent al grup alfa de les proteobacteries

Detalles del proyecto

Descripción

Los genes SOS codifican un conjunto de proteínas destinadas a reparar el DNA y garantizar la supervivencia celular. Estos genes están bajo el control negativo del represor LexA que se une a una secuencia específica denominada caja SOS. Las dos únicas cajas SOS conocidas hasta hace poco, y que presentan los palindromas CTGTN\sub 8\nosub ACAG y GAACN\sub 4\nosub GTTC, son las de \i E. coli\i0 y \i B. subtilis\i0 , respectivamente. Nuestro equipo ha identificado recientemente en el grupo alfa de las proteobacterias una nueva caja SOS, que responde a la repetición directa GAACN\sub 7\nosub GAAC. Hemos demostrado también la existencia en estas bacterias de un represor que se une a dicha secuencia y a su derivado palindrómico GAACN\sub 7\nosub GTTC. Esta versatilidad es una característica totalmente nueva que distingue al represor LexA de las bacterias alfa de todos los conocidos. Con el fin de profundizar en el conocimiento y la evolución del sistema SOS, el objetivo fundamental de este proyecto es el aislamiento del gen que codifica este nuevo tipo de represor LexA y la identificación de los aminoácidos que interaccionan con su correspondiente caja SOS. Para ello, se clonará y secuenciará el gen \i LexA\i0 de las especies del grupo alfa \i Rhizobium etli\i0 , \i Rhodobacter sphaeroides\i0 , \i Rhodobacter capsulatus\i0 y \i Paracoccus denitrificans\i0 . El gen \i lexA\i0 de \i R.etli\i0 se clonará a partir de una genoteca construida en el vector \lambdaZAP utilizando como sonda una serie de oligonucleotidos diseñados tras la purificación de la proteína LexA de dicha especie por cromatografía de afinidad y la secuenciación posterior de su región amino terminal. El resto de los genes "lexA" se obtendrán por hibridación, empleando el de \i R.etli\i0 como sonda. La comparación de las secuencias de todos estos genes nos permitirá establecer las regiones específicas del represor LexA propias del grupo alfa. Los residuos de este represor fundamentales para la
EstadoFinalizado
Fecha de inicio/Fecha fin1/10/981/10/01

Huella digital

Explore los temas de investigación que se abordan en este proyecto. Estas etiquetas se generan con base en las adjudicaciones/concesiones subyacentes. Juntos, forma una huella digital única.