Desenvolupament de biosensors per al diagnòstic serològic d'enfermetats virals: aplicació al diagnòstic d'animals infectats pel virus de la febe aftosa (VFA)

Se pretende utilizar la experiencia y resultados previos obtenidos por los grupos participantes para desarrollar un método diagnóstico serológico, sencillo y económico, utilizando la fiebre aftosa como modelo, basado en empleo de biosensores derivados de la \beta-galactosidasa, con posibilidad de ser aplicado como técnica rutinaria de diagnóstico de otras patologías. Como primer paso, se determinará el efecto en la actividad enzimática de la \beta-galactosidasa de inserciones de regiones antigénicas previamente identificadas (proteínas 3B y 3D) como diana de anticuerpos inducidos específicamente en animales infectados por el VFA. Se construirán enzimas \beta-galactosidasa híbridos conteniendo una o más copias por monómero de las regiones antigénicas del VFA elegidas, en lugares permisivos cerca del sitio activo previamente identificados y se caracteriza la reactivación enzimática producida por anticuerpos y sueros de animales infectados por el VFA en aquellas enzimas modificadas o combinaciones de las mismas, con una disminución fuerte de su actividad enzimática. Con aquellas construcciones que den mejores resultados, se optimizará la sensibilidad y especificidad de su reactividad con anticuerpos anti-virales específicos, mediante el empleo de diferentes condiciones de reacción y distintos sustratos. Finalmente se estudiará el potencial de los biosensores elegidos para permitir la detección serológica de animales infectados por el VFA. Para ello se utilizará una amplia colección de sueros de diferentes especies susceptibles al VFA que incluyen animales infectados, vacunados y animales naive