SCALING UP RECOMBINANT BCG BASED HIV VACCINE DEVELOPMENT. LESSONS LEARNED

Resum

El treball de recerca realitzat en aquesta Tesi Doctoral està dirigit a la millora del_x000D_ desenvolupament de la vacuna contra el VIH basada en BCG recombinant. La Tesi Doctoral_x000D_ inclou tres articles de recerca publicats en revistes “peer-reviewed” i una patent depositada a la_x000D_ Oficina Europea de Patents._x000D_ Inicialment, hem avaluat la influencia de l’edat i la ruta d’immunització en la inducció de respostes_x000D_ immunes especifiques front a VIH i M. tuberculosis després d’immunitzar ratolins BALB/c recent_x000D_ nascuts i adults amb BCG.HIVA222 i reforçar-los amb Modified Virus Ankara (MVA).HIVA. Les_x000D_ freqüències de cèl·lules CD8+ productores de IFN- γ eren superiors en ratolins adults vacunats_x000D_ per via intradèrmica i menors en ratolins adults i recent nascuts vacunats per via subcutànea. En_x000D_ tots els casos la producció de IFN-γ era significativament superior en ratolins induïts amb_x000D_ BCG.HIVA222 en comparació dels ratolins induïts amb BCGwt. Quan l’activitat Citotòxica dels_x000D_ limfòcits T (CTL) específica pel VIH es va comprovar, les freqüències de toxicitat específica eren_x000D_ superiors en ratolins recent nascuts que en ratolins adults. El programa vacunal d’inducció-reforç_x000D_ heteròleg amb BCG.HIVA222 i MVA.HIVA va ésser segur en ratolins recent nascuts._x000D_ L’administració de BCG.HIVA222 a ratolins recent nascuts és segura i immunogènica i va_x000D_ augmentar la resposta específica front a VIH induïda per la vacuna MVA.HIVA._x000D_ Seguidament, vàrem construir el pJH222.HIVACAT, un plasmidi llançadora que expressava_x000D_ l’immunogen de VIH subtipus A HIVA. Aquest vector llançadora utilitza un mecanisme lliure de_x000D_ resistències a antibiòtic basat en un sistema de Titració del Repressor de l’Operador (ORT) per_x000D_ la selecció i manteniment del plasmidi en cèl·lules E. coli i una complementació de lisina en_x000D_ micobactèria. Aquest vector llançadora es va electroporar una soca de BCG auxotròfica per lisina_x000D_ per generar la soca vacunal BCG.HIVACAT. Vàrem demostrar que el plasmidi episomal_x000D_ pJH222.HIVACAT era estable in vivo per un període de 20 setmanes, i vàrem caracteritzar_x000D_ genèticament i fenotípica la soca vacunal BCG.HIVACAT. La vacuna BCG.HIVACAT en combinació_x000D_ amb MVA.HIVA indueix una resposta de cèl·lules T productores de IFN- γ especifiques per VIH i_x000D_ M. tuberculosis. Per altra banda, quan es varen induir ratolins adults amb BCG.HIVACAT i es varen_x000D_ reforçar amb MVA.HIVA.85A, es varen induir cèl·lules T CD8+ especifiques per VIH que produïen_x000D_ IFN-γ, TNF-α, IL-2 i CD107a al ésser estimulades. Per tant, vàrem demostrat la immunogenicitat_x000D_ per cèl·lules T de una nova vacuna, més segura, compatible amb GLP, basada en BCG_x000D_ recombinant que expressa l’immunogen prototipus HIVA._x000D_ Finalment, hem construït un nou disseny de vacuna basada en micobactèria mitjançant la_x000D_ utilització d’un sistema de selecció de plasmidis lliure de resistència a antibiòtics. Hem construït_x000D_ un nou plasmidi llançadora per E. coli i micobactèria que expressa l’immunogen HIVA. Aquest_x000D_ vector llançadora utilitza un sistema de selecció i manteniment de plasmidis sense resistències_x000D_ a antibiòtics, que es basa en la complementació de glicina en E. coli i la complementació de lisina_x000D_ en micobactèria. Aquest plasmidi primer es va tranformar en una soca d’E. coli auxotròfica per_x000D_ glicina, i llavors es va transformar en una soca de BCG auxotròfica per lisina per generar la soca_x000D_ vacunal BCG. HIVA2auxo. Vàrem demostrar que el plasmidi episomal p2auxo.HIVA era estable in_x000D_ vivo per un període de 7 setmanes, i vàrem fer la caracterizació genètica i fenotípica de la soca_x000D_ vacunal BCG.HIVA2auxo. La vacuna BCG.HIVA2auxo, en combinació amb MVA.HIVA, va ésser_x000D_ segura i va produir cèl·lules T productores de IFN-γ especifiques per VIH i M. tuberculosis en_x000D_ ratolins BALB/c adults. Es varen induir cèl·lules T CD8+ polifuncionals especifiques per VIH que_x000D_ produïen IFN-γ, TNF-α i expressaven el marcador de degranulació CD107a. Així, hem construït_x000D_ una nova vacuna basada en BCG més segura i compatible amb les GLP fent servir l’immunogen_x000D_ HIVA._x000D_ Aquests sistema de selecció de plasmidis lliure de resistències a antibiòtics basat en la doble_x000D_ complementació d’auxotrofies podria ésser una nova plataforma vacunal micobacteriana per_x000D_ desenvolupar no només BCG recombinant que expressa immunògens de VIH de segona_x000D_ generació, sinó també d’altres patògens d’interès pediàtric per induir resposta protectiva just_x000D_ després de néixer.

Data del Ajut	19 de des. 2016
Idioma original	Anglès
Supervisor	Joan Joseph Munné (Director/a)