Preparacio d'antigens recombinants per a la detecció d'autoanticossos mitjançant enzimoimmunoanàlisi en la síndrome de Sjogren

Resum

La síndrome de Sjögren és una malaltia autoimmune amb una prevalença força elevada a la població general (entre el 0,5% i el 3%). Tal com succeeix en d'altres malalties d'aquesta naturalesa, la presència d'anticossos antinuclears (ANA) està àmpliament acceptada com a prova important en el seu diagnòstic. En el caso de la síndrome de Sjögren, el principal marcador serològic és la presència d'anticossos dirigits contra l'antigen SS-B (La), tot i que en alguns casos també s'ha descrit la presència única d'anticossos dirigits contra l'antigen SS-A (Ro), format per dues proteïnes (Ro60 i Ro52) associades a diferents RNA citoplasmàtics. En el treball que es presenta, es descriu el procediment d'obtenció de les proteïnes antigèniques SS-B (La) i SS-A (Ro), per tal de poder ser utilitzades posteriorment en el desenvolupament de dues enzimoimmunoanàlisis (ELISA anti-SS-B (La) i ELISA anti-SS-A (Ro)) útils per a la detecció d'anticossos dirigits contra elles. L'estrategia que es va seguir fou la següent: es van preparar tres vectors d'expressió en Escherichia coli de les tres proteïnes (SS-B, Ro60 i Ro52) mitjançant la tecnologia del DNA recombinant, es van expressar les tres proteïnes recombinants en els microorganismes procariotes en forma de proteïnes de fusió, es van purificar les proteïnes per cromatografia d'afinitat, es van immobilitzar per adsorció passiva en microplaques de poliestirè, i es van optimitzar les diferents variables dels assajos de tipus ELISA. Els dos assajos desenvolupats es van avaluar mitjançant l'estudi de les constants diagnòstiques i analítiques i l'estudi de les característiques analítiques. Per a l'ELISA anti-SS-B (La), es van obtenir els següents resultats: sensibilitat diagnòstica del 96%, especificitat diagnòstica del 97%, coeficient de repetibilitat del 2,1%, coeficient de reproductibilitat del 10,0%, i absència de reaccions creuades i interferències. Per a l'ELISA anti-SS-A (Ro) els resultats foren els següents: sensibilitat diagnòstica del 88%, especificitat diagnòstica del 91%, coeficient de repetibilitat de l'1,9%, coeficient de reproductibilitat del 10,6%, i absència de reaccions creuades i interferències.

Data del Ajut	21 de febr. 2002
Idioma original	No s'ha definit/desconegut
Supervisor	Petraki Munujos (Director/a) & F. Xavier Gella Tomàs (Tutor/a)