Micro-RNAs in ovarian cancer as tools for diagnosis and therapy

Tesi d’estudis: Tesi doctoral

Resum

El càncer d'ovari (CO) és la cinquena causa del càncer en dones i la principal causa de mort entre les malalties ginecològiques. Els símptomes inespecífics i les eines diagnòstiques actualment insuficients no detecten la malaltia en estadis inicials, quan la supervivència és del 90%. Així, al voltant del 70% dels pacients es diagnostiquen en estadis avançats, quan la supervivència és <25%. Mentre que el 80% de les pacients són inicialment quimiosensibles, el 85% d'elles desenvolupen resistència i moren per recurrència. Identificar nous biomarcadors de diagnòstic podria millorar la detecció precoç del CO. A més, desenvolupar noves estratègies terapèutiques eficients és primordial. Els micro-ARNs (miARNs) són ARN no codificants de 22nt que regulen múltiples processos silenciant ARNm diana, i s'han trobat alterats en càncer, essent possibles elements terapèutics. A més, són estables en circulació i, podrien ser eines diagnòstiques no invasives, mitjançant la saliva com a font de biomarcadors. Primer objectiu: identificar nous biomarcadors de diagnòstic per al carcinoma serós d'alt grau (HGSC). Així, 32 salives de pacients en estadis inicials i avançats de HGSC i controls van ser sotmeses a seqüenciació d'ARN. Aproximadament, es va obtenir 100 ng d'ARN per mL de saliva, amb qualitat suficient per a la seqüenciació d'ARN. Les anàlisis bioinformàtiques van mostrar al voltant del 36% de l'alineació amb el genoma humà, donant lloc a la detecció de més de 500 miARNs coneguts. L'anàlisi d'expressió diferencial va mostrar que 49 i 45 miARNs es trobàven alterats significativament en salives de les pacients amb HGSC d’estadi inicial i avançat en comparació amb els controls, respectivament. Curiosament, la família miR-34 apareix comunment alterada, amb tres membres de la família sobreexpressats en les salives de pacients amb HGSC, tant en estadis inicials com avançats, suggerint que podrien ser biomarcadors per millorar la detecció precoç de les pacients amb HGSC. Segon objectiu: identificar noves teràpies basades en miARNs pel CO avançat, ja que les teràpies dirigides s'han convertit en el Sant Grial pel tractament del càncer. Aquí, el miR-654 es va trobar significativament disminuit en teixits de CO comparat amb ovaris benignes. La sobreexpressió d'aquest miARN en línies cel·lulars de CO va disminuir significativament la proliferació cel·lular i va augmentar la mort cel·lular per apoptosis in vitro, acompanyada d'una activació de l’apoptosis a nivell molecular. Cal destacar que l'expressió ectòpica del miR-654 reproduïa in vivo les conseqüències fenotípiques descrites. A més, mitjançant un model preclínic amb cèl·lules derivades d’ascitis de pacients amb HGSC, s’ha demostrat que la sobreexpressió del miR-654 disminuïa la capacitat de formació d’esferes i la seva viabilitat. Mitjançant una anàlisi bioinformàtica dels possibles mRNAs diana del miR-654 es van predir diversos gens, entre els quals HAX1, RAB1B, PBX3, CDCP1 i PLAGL2 van disminuir a nivell de mRNA i proteïna amb la sobrexpressió del miR-654. L’assaig luciferasa va confirmar que el mirR-654 s’uneix directament al 3’UTR dels 5 ARNs diana esmentats. El silenciament d’aquests gens va mostrar que la depleció de CDCP1 i PLAGL2 fenocopia els efectes de la sobreexpressió del miR-654. Curiosament, els nivells de proteina d’ambdós gens estaven reduïts amb la sobreexpressió del miR-654 en el model preclínic utilitzant cèl·lules d’ascitis de pacients, suggerint que l'efecte terapèutic del miR-654 podria ser, en part, conseqüència de la inhibició de CDCP1 I PLAGL2. Finalment, l'anàlisi de microarrays va demostrar que la depleció de CDCP1 i PLAGL2 alterava les vies MYC, Wnt/β-cat, AKT i MAPK. En conjunt, s’ha suggerit que l'expressió ectòpica de miR-654 podria alterar vies importants en OC i que l'ús d'aquest miARN com a eina terapèutica podria millorar les teràpies actuals, potencialment en combinació amb la quimioteràpia estàndard.

Data del Ajut8 de set. 2017
Idioma originalAnglès
SupervisorAnna Santamaria (Director/a), Marta Marta Llauradó (Director/a), Rosa Miró Ametller (Tutor/a) & Marina Rigau Resina (Director/a)

Com citar-ho

'