ESTUDI DE LA REPROGRAMACIÓ DE CÈL·LULES ACINARS A CÈL·LULES BETA MITJANÇANT FACTORS DE TRANSCRIPCIÓ

Resum

La diabetis tipus 1 (T1D) és una malaltia autoimmune causada per la destrucció de_x000D_ les cèl·lules productores d’insulina del pàncrees, les cèl·lules β. La T1D esdevé_x000D_ clínicament aparent quan la majoria de les cèl·lules β han estat destruïdes, i restablir la_x000D_ massa de cèl·lules β per tal de mantenir una homeòstasi adequada de la glucosa és un_x000D_ dels principals reptes de la medicina regenerativa. La generació de noves cèl·lules β a_x000D_ partir de la reprogramació d’altres tipus cel·lulars, com per exemple les cèl·lules_x000D_ acinars, és una nova estratègia terapèutica amb un gran potencial. A més, la_x000D_ reprogramació de cèl·lules acinars comporta certs avantatges respecte la reprogramació_x000D_ d’altres tipus cel·lulars diferenciats, ja que n’hi ha una gran abundància al pàncrees,_x000D_ comparteixen un origen comú amb les cèl·lules β durant l’embriogènesi i resideixen al_x000D_ mateix òrgan que les cèl·lules β. Diversos estudis han descrit que l’expressió mitjançant_x000D_ vectors adenovirals de primera generació (FG-Ad) de Pdx1, Ngn3 i Mafa (PNM), tres_x000D_ factors de transcripció específics de cèl·lula β, en cèl·lules acinars aconsegueix_x000D_ reprogramar aquestes cèl·lules cap a cèl·lules productores d’insulina. No obstant,_x000D_ aquests estudis indiquen que la transducció amb vectors FG-Ad és necessària pel procés_x000D_ de reprogramació, i la funcionalitat de les cèl·lules reprogramades no és exactament_x000D_ igual a la de les cèl·lules β madures._x000D_ Per tal d’aprofundir en els mecanismes moleculars implicats en la reprogramació de_x000D_ cèl·lules acinars a cèl·lules β, en aquest treball s’ha analitzat la capacitat de_x000D_ reprogramació de tres línies cel·lulars acinars (266-6, AR42J i AR42J-B13) al ser_x000D_ transduïdes amb un vector FG-Ad codificant per PNM. S’ha observat que les tres línies_x000D_ cel·lulars responien de manera molt diferent a la sobreexpressió de PNM, i que la línia_x000D_ cel·lular AR42J-B13 (B13) presentava una eficiència de reprogramació major a les_x000D_ demés línies cel·lulars, evidenciada per una major activació de l’expressió de marcadors_x000D_ de cèl·lula β._x000D_ En una caracterització més detallada del fenotip de les cèl·lules B13_x000D_ reprogramades, s’ha pogut observar que aquestes presentaven moltes de les_x000D_ característiques de les cèl·lules β diferenciades adultes, com l’expressió de gens_x000D_ processadors de la pro-insulina, l’expressió dels sensors de la glucosa i la producció de_x000D_ la proteïna de la insulina. No obstant, la insulina produïda per aquestes cèl·lules no era_x000D_ secretada d’una manera eficient i tampoc estava regulada per la glucosa._x000D_ D’altra banda, s’ha estudiat el paper dels vectors adenovirals en el procés de_x000D_ reprogramació, i s’ha demostrat que la transducció adenoviral per se regula_x000D_ negativament l’expressió de gens exocrins, suggerint que aquests vectors produeixen un_x000D_ efecte de desdiferenciació sobre el fenotip acinar._x000D_ Amb l’objectiu d’identificar microRNAs involucrats en el procés de reprogramació,_x000D_ s’ha realitzat un estudi del perfil d’expressió de microRNAs. S’ha observat que les_x000D_ cèl·lules AR42J i B13 presentaven patrons d’expressió de microRNAs completament_x000D_ diferenciats, identificant-se fins a 60 microRNAs diferentment expressats entre les dues_x000D_ línies cel·lulars. Les cèl·lules B13 presentaven alguns signes de trobar-se en un estat_x000D_ més indiferenciat que les cèl·lules AR42J, com la supressió de l’expressió de la família_x000D_ de miR-200, fet que podria facilitar la seva reprogramació. També s’han identificat 11_x000D_ microRNAs involucrats en la transducció adenoviral i 8 microRNAs associats a la_x000D_ sobreexpressió de PNM._x000D_ En resum, en aquest treball s’ha aprofundit en els mecanismes involucrats en la_x000D_ reprogramació de cèl·lules acinars a cèl·lules β, i s’han identificat microRNAs_x000D_ involucrats en aquest procés, els quals podrien ajudar a millorar l’eficiència de_x000D_ reprogramació cap a cèl·lules β pel tractament de la diabetis mellitus.

Data del Ajut	10 de jul. 2015
Idioma original	Català
Supervisor	Eduard Ayuso López (Director/a)