Optimització dels processos de síntesi i secrecció de proteïnes heteròlogues en el sistema pichia pastoris

L'eficient producció de proteïnes recombinants és la passa clau per a la seva aplicació a escala industrial (producció d eproteïnes d'interés terapèutic, enzmins industrials...). Per a això és necessari conèixer profundament la relació estructura-funció de la proteïna d'interès. L'eficàcia del procés depèn de la combinació de diverssos factors de naturalesa genètica i fisiològica tals com els components funcionals dels vectors d'expressió utilitzats, el \i background\i0 genètic del microorganisme hoste i les condicions de creixement. Altres factors poden determinar la qualitat o puresa del producte final, per exemple el correcte plegament i glicosilació del producte necessaris per a la seva plena activitat biològica i la seva secrecció al medi de cultiu per a facilitar el posterior procés de purificació. Als darrers anys el llevat metilotròfic \i Pichia pastoris\i0 s'ha revelat com una excel·lent 'fàbrica cel·lular' per a la producció de proteïnes hetròlogues de molt diversa natura amb altes productivitats. L'objectiu d'aquest projecte es centra en diverssos aspectes del procés de producció i secrecció del sistema relativament poc coneguts i susceptibles de ser millorats. Concretament l'estudi es centrarà en la millora de la producció de dues lipasses de diferent origen (\i Candida Rugosa\i0 , CRL, y \i Rhizopus oryzae\i0 ) d'àmplies aplicacions en la producció de compostos intemediaris o productes finals de síntesi de fàrmacs òpticament purs. Aquesta millora integrarà aspectes de millora de vectors d'espressió, per exemple: l'expressió de múltiples còpies dels gens \i CRL\i0 y \i ROL\i0 , la construcció de mutants supersecretius, i la optimització de les condicions fisiològiques d creixement i producció per a aquests nous sistemes d'expressió. Tot això sota un enfocament multidisciplinar i complementari clarament reflexat en l'experiència investigadora d'ambdós grups sol·licitants.