Mort cel·lular induïda per inhibició de la CTP: fosfocolina citidililtransferasa: mecanismes moleculars d'una possible estratègia antitumoral

El presente proyecto pretende desentrañar el/los meccanismos moleculares que conducen a la muerte cellular cuando se inactiva la CTP: fosfocolina citidililtranferasa (CCT), la enzima reguladora de la ruta de biosíntesis de fosfatidilcolina, el fosfolípido mayoritario de las membranas celulares. Nuestros resultados previos demuestran que existe una estrecha correlación entre la potencia para inhibir la CCt de análogos sintéticos de ceramida y alquil-lisofosfolípidos-fármacos empleados en terapia antitumoral-y su efecto citotóxico, lo que conierte a esta enzima en una diana farmacológica clave par el desarrollo de nuevas moléculas antitumorales. Puesto que estos fármacos afectan vías de señalización relacionadas con la supervivencia celular (MEK-ERK, Akt. Etc..) ya sea por inhibición directa o como consecuencia de su acción primaria sobre la CCT, este proyecto propone el estudio detallado de la muerte inducida a temperatura restrictiva en la línea CHO MT-58, que posee una CCT termosensible, lo que permitirá discernir entre efectos directos de los inhibidores de la CCT actuando sobre otras dianas farmacológicas y efectos derivados de la propia inhibición de la enzima. Sobre estas bases se proponen los siguientes objetivos: 1. Establecer el modo de muerte celular en la línea MT-58 tras cultivar las células a temperatura restrictiva (40ºC) y compararlo con la citotoxicidad inducida por C2-ceramida y ET-18-OCH3 en células control CHO-K1.2. Analizar la expresión de las isoformas de la CCt en células CHO e inactivarlas selectivamente mediante siRNA verificando el modo de muerte celular, y viceversa, ensayar el potencial protector de la transfección con CCt \alphay CCt\beta. 3. estudiar la regulación de las isoformas de la CCt en células CHO y en astrositos durante el ciclo celular, correlacionando la citotoxicidad diferencial de los inhiidores de la CCt y la inactivación térmica con la actividad CCT a lo largo del ciclo celular (...)