MODULAR NANOSTRUCTURED PROTEINS AS ANTIGEN DELIVERY TOOLS FOR FISH RELEVANT VIRAL DISEASES: TARGETING SPECIFIC TISSUES AND CELLS.

La prevención y control de las enfermedades virales que tanto daño hacen a la acuicultura depende del desarrollo de vacunas seguras con una buena relación coste-eficacia. Las vacunas basadas en proteínas recombinantes ofrecen esas dos ventajas. Al iniciarse el proyecto ya se disponía de las técnicas de producción y obtención de los antígenos virales en forma de nanopellets (NPs) producidos en E. coli en forma de cuerpos de inclusión: IPNV-VP2, VHSV-G y VNNV-C. En este proyecto se ha ido un paso adelante, al plantear un diseño modular de los NPs: incorporando un módulo estimulador de la respuesta inmunitaria (interferón gamma, IFNg); y un módulo para direccionar el NP hacia un tejido específico. Esto se ha hecho para el virus de la viremia primaveral de la carpa (SVCV-G), el virus de la septicemia hemorrágica vírica (VHSVG), y el virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV-VP2).
Tras la caracterización estructural y química de los NPs se analiza su biocompatibilidad, captación y efecto inmunoestimulador en distintas líneas celulares. Así, con los NPs de VHSV-G e IPNV-VP2 se ha visto la estimulación de genes clave de la respuesta inmune en líneas celulares de trucha: macrófagos, epiteliales y eritrocitos. Para los NPs de SVCV (SVCV-G y SVCV-GIFN) se utilizó una línea de pez cebra (ZFL), donde se observó que las células internalizaban las partículas, y que esto daba lugar a la estimulación de ocho genes de respuesta inmune (vig1, mx, ifn, irf1, ifngr1, lmp2, tnfa, ccl4, il10), y que SVCV-G-IFN^NP era más potente estimulador que el SVCV-G^NP, demostrando la eficacia del módulo de IFN. La prueba final de vacunación de peces cebra por inyección intraperitoneal y desafío con SVCV dio unos excelentes resultados de protección (> 60% de reducción de la mortalidad) en los vacunados con el SVCV-G-IFN^NP. Los ensayos de vacunación en pienso de trucha arcoiris con VHSV-G-IFN^NP y desafío con VHSV han indicado una capacidad prometedora de protección en los vacunados.
La incorporación de los módulos de ligando a los NPs de IPNV (epitelio intestinal), NPs de VHSV (eritrocito) y de macrófagos indica un buen targeting de la vacuna. En definitiva, se ha producido una nueva generación de vacunas recombinantes que ha demostrado su eficacia frente a dos virus de interés en acuicultura de carpa y trucha.