Mètodes estructurals i quimioluminiscents per a l'anàlisi de cromatina, proteïnes i DNA.

Recentment hem publicat els resultats d'investigacions sobre l'estructura de petits fragments de cromatina d'erocits de pollastre (Bartolomé et al., J Cell Sci., 107 (1994) 2983-2992 y J. Biol. Chem., 270 (1995) 22514-22521). En aquestes investigacions ehm utilitzat tècniques electroforètiques no desnaturalitzants i de microscopia electrònica que ens han permès estudiar detalladament el plegament i l'estructura interna d'aquests fragments de cromatina. Els nostres resultats demostren que en el cas dels eritrocits la cromatina forma estructures helicoidals simples i molt compactes. En el present projecte es pretén aplicar els procediments electroforètics i de microscopia electrònica desenvolupats per els eritrocits de pollastre, per estudiar l'estructura de petits fragments de cromatina corresponents a teixits amb diferents nivells d'activitats genètica (fetge de rata, timus de vadella, esperma d'eriçó de mar). També estudiarem llevats, per a conèixer fins a quin punt un sistema sense histona H1 pot estructurar la cromatina, intentarem trobar condicions que ens permetin la desnaturalització progresiva del fragments compactes de cromatina. Per altra banda, al nostre laboratori hem desenvolupat métodes fluorescents per a la detecció de proteïnes en gels electroforètics [Dabán et al., \i Anal. Biochem., 199\i0 (1991) 169-174; Bermúdez et al., \i BioTechniques, 16\i0 (1994) 621-624]. Aquestes contribucions, i tota la nostra experiència prèvia en el camp de les sondes fluorescents, en s ha estimulat a investigar les aplicacions en Biologia Molecular de reactius quimioluminiscents (esteres de l'àcid oxàlic) que són capaços d'excitar a fluoròfors diversos. En aquesta segona part del projecte es pretén desenvolupar mètodes que permetin utilitzar els reactius quimioluminiscents TCPO i DNPO per a la detecció de proteïnes (en gels i Western blots) i DNA (en gels normals i de seqüènciació, i a Southern blots).