Funció biològica i relacions estructura-funció en la família de les alcohol deshidrogenases

Les alcohol deshidrogenases (ADH) constitueixen una extensa família d'enzims relacionats, ampliament distribuida en la naturalesa. Aquests enzims s'han agrupat en classes en base a la seva estructura primaria i propietats cinètiques. Encara que totes les ADH oxiden reversiblement alcohols, la seva especificitat de substrat i , per conseqüència, la seva funció biològica, varien considerablement entre les classes. En el present projecte anem a proseguir els estudis de caracterització estructural i funcional de les ADH classe III i classe IV de distintes espècies. La classe IV es distribueix en epitelis, i és característica de la mucosa de l'estomac. És l'ADH més activa, amb elevades kcat i Km, pel que identificarem per mutagènesis digirida els residus responsables d'aquestes propietats. També estudiarem l'estructura del gen de la classe IV humana, per comprendre la regulació de la seva expressió. mitjançant tècniques inmunohistoquímiques i d'hibridació \i in situ\i0 estudiarem la localització detallada de l'expressió de la classe IV en els teixits de rata, fent émfasi en el cervell. Per la seva banda, la ADH classe III funciona com a "formaldehído" deshidrogenassa dependent de glutació. Determinarem els residus importatnts en l'especifitat enzimàtica mitjançant mutagènesi dirigida i mutagènesi a l'atzarutilitzant la classe III de \i Saccharomyces cerevisiae\i0 . En aquesta espècie determinarem també les proteïnes que interaccionen amb la classe III, i averiguarem la posible localització de l'enzima en el nucli cèl·lular. Per a conèixer el paper de la classe III en el s vegetals, estudiarem l'enzima de l' \i Arabidopsis thaliana\i0 . S'expressarà l'enzima en una soca ADH classe III de llevat i s'estudiarà la localització de l'enzima en els teixits d'\i Arabidopsis\i0 , i la capacitat de la planta en captar i metabolitzar el "formaldheído", tant a nivell de planta sencera com de cultius cèl·lulars, per a determinar el possible paper desintoxicador de la plant