Estructura de la cromatina condensada en els cromosomes metafísics i anàlisi luminiscent d'electroforesi bidimensional

El punt de partida de la primera part d'aquest projecte és un treball teòric que hem publicat prèviament sobre les restriccions físiques que existeixen en la condensació de la cromatina en els cromosomes metafísics. L'objectiu general d'aquesta part és l'estudi de les estructures d'ordre superior contingudes en les formes condensades de la cromatina. Aquest objectiu serà abordat mitjançant dues aproximacions experimentals complementàries: a) estudi de les estructures formades per associació de fibres de 30-40 nm; b) estudi de les estructures d'ordre superior presents en els cromosomes metafísics. S'investigaran les condicions iòniques, compatibles amb els valors cel·lulars coneguts en l'actualitat, necessàries per a provocar l'associació de fibres. Es prepararan cromosomes metafísics i prometafísics de cèl·lules HeLa, i d'espècies (pollastre i \i Drosophila\i0) que contenen cromosomes de petita grandària en el seu cariotipus. Per a investigar les estructures cromatíniques contingudes en els cromosomes, s'utilitzaran condicions iòniques, i tractaments amb agents desnaturalitzants, que provoquin una desestructuració parcial de les cromàtides. En aquests estudis s'utilitzarà microscòpia electrònica de transmissió i d'escombrat, i microscòpia de força atòmica. En la segona part del projecte es pretén investigar exhaustivament la reacció quimioluminiscent del peroxioxalat, amb l'objectiu de millorar la sensibilitat arribada prèviament en el nostre laboratori en la detecció de proteïnes i DNA transferits a membranes. És un objectiu important perquè aquesta reacció té un elevat rendiment quàntic i no requereix enzims, però encara no ha trobat aplicacions competitives en Biologia Molecular perquè necessita mitjans orgànics per a produir-se. A més, també es proposa com objectiu l'extensió d'aquests mètodes quimioluminiscents per a l'anàlisi de gels bidimensionals