Enginyeria d'interaccions moleculars intracèl·lulars; aplicació al disseny de biosensors i al control de la desagregació proteïca

El projecte proposat té com objectiu general l'anàlisi funcional i mecanístic de 2 tipus d'interaccions intermoleculars intracèl·lulars: aquelles en les quals intervnen lligams recombinants que resulten en canvis conformacionals amb impacte en l'activitat enzimàtica, i aquelles entre proteïnes mal plegades i xaperones que condueixen al seu dipòsit com agregats o cossos d'inclusió. En aquest context, hi ha quatre objectius parcials clarament definits (2 en cada àrea): 1.Millorar la funcionalitat i robustesa de sensors enzimàtics basats en l'enzima \beta-galactosidasa (portadora de péptids antigènics forans) a través de la identificació de nous llocs (i/o combinacions de llocs) d'inserció peptídica en l'enzim, l'increment de la relació senyal-resposta mitjançant l'optimització de les condicions de l'assaig, i l'enginyeria de l'enzima per a millorar la seva sensibilitat. Es pretén asseure bases teòric-pràctiques per a un millor disseny racional de biosensors aplicats al diagnòstic de malalties infeccioses, la detecció d'anticossos i d'antígens i la senyalització de lligams específics, que permetin millorar el procés de detecció per a la seca eventual automatització en un assaig homogeni. 2. Avaluar la funcionalitat d'aquests sensors en condicions intracèl·lulars, per a construir sistemes d'identificació i selecció positiva de lligams específics d'entre llibreries d'anticossos recombinants. Es pretén aconseguir un sistema intracèl·lular basat en l'enzim \beta- galactosidasa que resulti en un increment d'activitat de l'enzim com resposta a la presència d'anticossos específics. Al seu torn, en un fons genètic adequat (LacZ-) i un mitjà de conreu apropiat (lactosa com font de carboni), optimitzar el creixement diferencial dels clons bacterians positius.3. Portar a terme una anàlisi proteòmica de la formació de cossos d'inclusió..4 Determinar els mecanismes cel·lulars que intervenen en la solubització de proteines