Diagnòstic genètic preimplantacional mitjançant l'anàlisi del primer corpuscle polar: detecció d'aneuploidies, d'alteracions cromosòmiques estructurals i de mutacions en el gen CFTR

El Diagnòstic Genètic Preimplantacional (DGP) mitjançant anàlisi del primer corpuscle polar (1CP) permet analitzar, indirectament, mitjançant ovocits mantenint tota la seva capacitat reproductora. El DGP-1CP disposa de fins quatre dies d'anàlisi el que suposa un avantatge respecte al diagnòstic en blastòmers d'embrions de 6-8 cèl·lules que només disposa de dos dies. Dintre d'un cicle de FIV es poden transferir embrions procedents de ovocits no patològics sense necessitar la congelació d'embrions. Amb el DGP-1CP es detectaran alteracions cromosòmiques numèriques i estructurals en dones d'edat avançada i portadores de reorganitzacions cromosòmiques minimitzant el risc de descendència amb dotacions cromosòmiques anòmales responsables d'avortaments, de síndromes patològiques viables o de baixa taxa d'implantació. Hem evidenciat que les dones portadores de reorganitzacions cromosòmiques presenten alteracions de cromosomes implicats i no implicats en la reorganització el que fa molt adequat analitzar, a més dels cromosomes implicats en la reorganització, els implicats més freqüentment en aneuploidíes. Per a això aplicarem els mètodes d'anàlisi d'hibridació in situ fluorescent (FISH) múltiple per a 9-11 cromosomes en fins quatre rondes de FISH i el mètode d'Hibridació Genómica Comparada (HGC) en 1CPs aïllats. Amb ambdós mètodes obtindrem resultats concloents amb major rapidesa. Amb el DGP-1CP es detectaran 31 mutacions del gen CFTR més freqüents a Europa sud i podrem aconseguir descendència no afectada de Fibrosis quística de dones portadores. S'aplica el kit CF Assay de. Biosystems. Després d'una PEP de 1CP aïllat, vam realitzar una PCR múltiplex per a 29 alelos. El kit conté 15 parells de cebadores que amplifiquen fragments de DNA amb aquestes mutacions. Un enzim lliga un escandall normal o mutant amb un escandall comú marcat amb fluorocrom (blau, verd o groc) que han hibridat amb fragments de DNA diana.