Desenvolupament d'un nou reactiu enzimàtic per a la detecció ràpida d'anticossos contra el virus de la Hepatitis B Humana

Es proposa utilitzar el principi d'activació enzimàtica de la \beta-galactosidasa d' \i Escherichia coli\i0 , identificat en el projecte BIO95-0801 (Benito et al., 1996 J Biol. Chem. 271, 21251), per a construir en reactiu de diagnòstic per a la hepatitis B humana, basat en la detecció ràpida d'anticossos antivirus. Es proposa inserir variants de longitud del pèptid (des dels aminoàcids 121 al 147 de la proteïna HBsAg) entre els residus 278 i 279 y/o adjacents del bucle activador de l'enzim \beta-galactosidasa de \i Escherichia coli, \i0 i si procedeix, estendre les fusions a l'extrem C-terminal d'aquest enzim. L'activitat enzimàtica que és posteriorment recuperada després de la unió amb anticossos específics, d'una manera dependent de títol. Ja que no existeixen encara bases estructurals per a la reactivació enzimàtica, es proposa una aproximació empírica a través de la generació de variants de l'enzim quimèric i modificació de seqüències adjacents al lloc d'inserció, per a obtenir un nou reactiu enzimàtic de diagnòstic. Aquesta nova sonda molecular per a una detecció enzimàtica d'anticossos, ha de tenir un baix cost de producció, ser fàcilment purificable, amb una activitat enzimàtica residual molt baixa i una bona resposta dependent del títol de sèrum, i que pugui ser competitiva amb els assaigos actualment disponibles per a detecció serològica de la infecció pel virus de la hepatitis B.