Desenvolupament de biosensors per al diagnòstic serològic d'enfermetats virals: aplicació al diagnòstic d'animals infectats pel virus de la febe aftosa (VFA)

Es pretén utilitzar l'experiència i resultats previs obtinguts pels grups participants per a desenvolupar un mètode diagnòstic serològic, senzill i econòmic, utilitzant la febre aftosa com model, basat en ocupació de biosensors derivats de la \beta-galactosidasa, amb possibilitat de ser aplicat com tècnica rutinària de diagnòstic d'altres patologies. Com primer pas, es determinarà l'efecte en l'activitat enzimàtica de la \beta-galactosidasa d'insercions de regions antigèniques prèviament identificades (proteïnes 3B i 3D) com diana d'anticossos induïts específicament en animals infectats pel VFA. Es construiran enzims \beta-galactosidasa híbrids contenint una o més còpies per monòmer de les regions antigèniques del VFA triades, en llocs permissius prop del lloc actiu prèviament identificats i es caracteritzarà la reactivació enzimàtica produïda per anticossos i sèrums d'animals infectats pel VFA en aquells enzims modificats o combinacions de les mateixes, amb una disminució forta de la seva activitat enzimàtica. Amb aquelles construccions que donin millors resultats, s'optimitzarà la sensibilitat i especificitat de la seva reactivitat amb anticossos anti-virals específics, mitjançant l'ocupació de diferents condicions de reacció i diferents substrats. Finalment s'estudiarà el potencial dels biosensors triats per a permetre la detecció serológica d'animals infectats pel VFA. Per a això s'utilitzarà una àmplia col"lecció de sèrums de diferents espècies susceptibles al VFA que inclouen animals infectats, vacunats i animals naive