Caracterització fisiològica, estructural i cinètica dels enzimes Adh6p, Adh7p, Bhd1p i Yal061p de S. cerevisiae. Aplicacions a la indústria biotecnològica

L'objectiu proposat en el present projecte és la caracterització fisiològica de quatre alcohol deshidrogenasa (Adh6p, Adh7p, Bhd1p i Yal061p), de Saccharomyces cerevisiae. Considerant les activitats enzimàtiques de Adh6p, Adh7p i Bhd1p i les vies metabòliques conegudes en S.cerevisiae, hem inferit la seva possible participació en la formació dels alcohols superiors (Adh6p i Adh7p) i en la formació de 2,3-butanodiol (Bhd1p i Yal061p). Ja que les seves activitats enzimàtiques requereixen NADP/NADPH (Adh6p, Adh7p) i NAD/NADH (Bhd1p i probablement Yal061p), podrien estar implicats en l'homeostasis d'aquests coenzims. Recents estudis realitzats amb xips genòmics indiquen la seva inducció en condicions d'estrès oxidatiu i salí. Estudiarem, doncs, la participació d'aquestes deshidrogenases en els processos esmentats, mesurant tant els seus nivells d'expressió, com la producció d'alcohols superiors, 2,3-butanodiol i balanços redox NAD/NADH i NADP/NADPH en diferents medis de cultiu i en diferents fases de creixement. Aquests experiments seran realitzats amb ceps delecionats en les deshidrogenases i els corresponents ceps "control". Complementarem els esmentats estudis, seguint els nivells de les quatre Adhs en diferents condicions d'estrès oxidatiu (meniadona, diamida, H2O2) i salí (NaCl). Ja que hem resolt recentment l'estructura 3-D de Adh6p, realitzarem experiments de mutagènesi dirigida sobre l'enzim, que en pertànyer a la família de les cinamil alcohol deshidrogenases, té una gran rellevància biotecnológica. També ens proposem estudiar en aquest projecte, la utilització de Bdh1p per a la presentació de productes quirals d'interès per a la indústria química i per eliminar productes que confereixen propietats organolèptiques desagradables a la cervesa.