Caracterització de la interacció entre la proteïna AIRE i altres proteïnes

(...) L'objectiu d'aquest projecte és la caracterització del complex del qual forma part AIRE i comprovar si AIRE interacciona amb les proteïnes SIP i Siah a través del motiu PXAXVXP. S'utilitzaran tècniques proteòmiques (2D gels i identificació per fingerprinting dels spots) per a la caracterització del complex del qual forma part AIRE. A més, es faran las següents mutacions del motiu PXAXVXP: P1A, V3A i P4A (tant de forma individualitzada com conjunta) mitjançant mutagènesi dirigida. Es clonaran les proteïnes SIP i Siah amb un tag de myc (no existeixen anticossos específics d´aquestes proteïnes humanes). Es faran transfeccions transitòries de totes les construccions, immunoprecipitacions amb anticossos anti-AIRE i anti myc (per les proteïnes SIP i Siah) i westerns blots de les proteïnes correspondents per analitzar la interacció d´AIRE amb SIP i Siah i el paper del motiu estructural PXAXVXP en la mateixa.Així mateix farem estudis de colocalització per microscòpia confocal de les proteïnes AIRE, SIP i Siah i d'altres que es trobin durant l'anàlisi proteòmic