Basses Moleculares de la Actividad enzimatica, plegamiento y funciones biologicas de las Ribonucleasas

La ribonucleasas (RNasas) són enzims que, donades les seves propietats.sópn models idónis per els estudis dels processos de catàlisi, interacció enzim-substrat i plegament proteíc, a més en el estudi d'aquests enzims s'han obert noves possibilitats com a conseqüencia de la seva implantaació en diferents processos cel·lulars. El present projecte te como finalitat avançar en el conoxeiment de les bases moleculars que defineixen les propietats estructurals i funcionals de les RNasas. S'han definit 4 objectius generals que tenen en comú, des del punt de vista metodològic, l'analisi de l'efecte produït per l'introducció de variants, per mutagènesi dirigida, amb respecte de la seva forma: 1)Estudi de les bases moleculars i estructurals que defineixen la activitat enzimàtica daae la proteína catiónica de eosinófilo (ECP), de la neurotoxina derivada de eosinófilo (EDN) i de la RNasa humana de pàncrees (HP-RNasa) en relació amb la RNasa de páncrees boví (RNasa A); aen cada caso el anàlisi que es plantea és específic, ve definit per els cononeixements sobre el procés de catàlisi i la estructura de la proteína va dirigida a establir les bases estructurals de la catàlisi de les RNasas. 2) Estudi de la contribució de residus que formen part d'un nuclihidrofóbic sobre l'estabilitat global i camí de plegament de les RNasas de páncrees i anàlisi de l'efecte de la presió sobre l'estructura proteíca en relació amb l'efecte produït per altres agents desnaturalizadors; en aquest objectiu, donada la informació prèvia de que es disposa, s'urilitzarà com a model d'estudi la RNasa A. 3) Obtenció de variants de la RNasa humana de páncrees (HP-RNasa) dirigides a augmentar la sevca activitat citotóxica i de variants de l'onconasa dirigidas a incrementar la seva activitat RNasa; les variants que se proposen es basen en l'anàlisi de les estructures tridimensiionals de cada una de les proteínes i es realitzarant estudis estrucaturals i de termoestabilitat de la HP-RNasa